인간 제대혈 림프구 체외 증폭시 조절 T 림프구의변화 양상 및 특징
Characterization of regulatory T cells in ex vivo expansion of human umbilical cord blood
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=목적: 조절 T 림프구는 CD4와 CD25를 표현하는 특정 T 림프구를 일컬으며, 자아에 대한 면역반응을 억제하는 역할을 하고 있다. 성인에서도 림프구는 그 자체가 실험실 배양 및 증폭이 까다롭다는 점 때문에 연구에 많은 제한을 받고 있지만 제대혈에서 분리해 낸 림프구, 특히 T 림프구는 적절한 배양 환경만 확립된다면 다양한 기능을 가진 여러 세포로 분화할 수 있고, 자기 복제능이 탁월하다. 본 연구는 만삭 산모와 정상 성인 여성의 말초 혈액, 그리고 제대혈내의 조절 T 림프구의 분포에 차이가 있는지 확인함으로써 산모와 태아간 면역 관용상태에 조절 T 림프구가 관여하고 있는지 알아보고, 또한 제대혈 림프구의 체외 증식이 조절 T 림프구의 분포에 어떤 영향을 미칠 것인가를 확인하여 조절 T 림프구를 다량으로 획득할 수 있는 방법을 확립해 장차 세포치료 등 임상적 이용을 앞당기고자 하였다.연구 방법: 각각 10명의 비임신 성인 여성과 만삭 산모의 말초혈액 및 제대혈에 항 CD3 항체, 항 CD4 항체, 항 CD25 항체, 항 CD152 항체를 첨가한 후 FACSort flow cytometry를 이용하여 세포 표식자 분석을 시행하였다. 제대혈은 Ficoll- Hypaque 밀도 기울기 원심 분리법으로 단핵구 세포를 분리하여 항 CD3 항체와 IL-2를 이용한 체외증폭을 시행한 후, 배양 제 0, 4, 11, 21일에 세포 표식자 분석과 FoxP3의 발현도를 측정하였다. 또한 MACSTM kit를 이용하여 CD25-와 CD25+ T 림프구를 분리하여 CD25+ 림프구의 조절 T 림프구 여부를 FoxP3의 발현을 통해 확인하였다.결과: 제대혈내의 CD4+CD25++ T 림프구는 정상 성인 여성과 산모의 말초혈액보다 높은 분포를 나타냈으며, 만삭 산모는 비임신 여성보다 CD4+CD25++ T 림프구가 유의하게 적었다 (p<0.05). 제대혈 림프구를 체외 배양했을 때 CD4+CD25++ 그리고 CD152+ T 림프구의 비율은 4일째 현저하게 높아지고 11일째 이후로 감소하는 소견을 보였고 (p<0.05), 이는 FoxP3의 발현 정도와도 일치한 결과를 보였다. 분리된 CD4+CD25+ T 림프구는 CD4+CD25- T 림프구에 비해 FoxP3 발현량이 의미있게 높았다 (p<0.05).
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