산수유(Corni fructus)에서 분리한 항산화 생리활성물질의 특성
Isolation of antioxidant components from Corni fructus
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산수유 열매의 건강 기능성 소재화를 위하여 산수유 열매의 90% 에탄올 추출물을 용매 분획하여 항산화능을 측정하고, 이에 기여하는 활성 성분(morroniside, loganin)을 Diaion HP 20 gel로 분리하였다. 산수유 열매의 추출물 및 획분의 항산화능 측정 결과, 이 중 ethyl acetate 획분에서 항산화능이 가장 높게 나타났다(p<0.05). 이를 이용하여 Diaion HP 20 gel column chromatography를 실시하였으며, 20%, 40%, 60%, 80% ethanol 획분을 얻었다. 40% Ethanol 획분에서 항산화 활성인 DPPH 라디칼 소거 활성(10.22 mM GAE), ABTS 라디칼 소거 활성(37.29 mM TE), FRAP 활성(27.32 mM TE)으로 가장 높게 나타났다(p<0.05). 항산화 성분 함량인 총페놀성화합물 함량(580.84 GAE mg/100 mL), 총플라보노이드 함량(166.24 CE mg/100 mL) 및 총안토시아닌 함량(0.74 mg/100 mL)은 항산화 활성의 결과와 같은 경향을 나타냈다. Ethyl acetate 획분을 Diaion HP 20 gel을 이용하여 분획하였을 때 40% ethanol 획분에서 항산화능이 가장 높게 나타났으며, 물질 분리로 인하여 항산화능이 증가한 결과를 보였다. 항산화능이 높게 나타난 ethyl acetate 획분의 활성 성분을 HPLC로 분석한 결과 morroniside와 loganin의 함량은 각각 36.02 μg/mL 및 149.72 μg/mL로 가장 높았다(p<0.05). 또한, Diaion HP 20 gel을 이용하여 얻은 획분에서 morroniside와 loganin성분을 HPLC로 분석한 결과, 40% ethanol 획분이 가장 높았다(p<0.05). UPLCMS를 이용하여 40% ethanol 획분의 활성 성분을 분석한 결과, morroniside 및 loganin의 parent ion이 각각 405[M-H]-와 451[M+COOH-H]-, 389[M-H]-와 435[M+COOH-H]-로 나타났다. 따라서, 산수유 열매의 40% ethanol 획분의 항산화능에 loganin이 기여하는 것으로 사료된다.
Abstract
A 90% ethanol extract of Corni fructus was fractioned and the active components (i.e., morroniside, loganin) were isolated for functional food materialization. More specifically, the ethanol extract was fractioned according to the solvent polarity (i.e., n-hexane, ethyl acetate, and n-butanol), and the ethyl acetate fraction was found to exhibiti the highest antioxidant capacities (i.e., total phenolic content = 145.84 GAE mg/100 mL, DPPH radical scavenging activity = 7.91 mM GAE, FRAP activity = 18.86 mM TE, ABTS radical scavenging activity = 13.36 mM TE). Diaion HP 20 gel was used for separation of the ethyl acetate fraction, and 20%, 40%, 60%, and 80% ethanol fractions were also examined. The 40% ethanol fraction was found to exhibit the highest DPPH radical scavenging activity (10.22 mM GAE), ABTS radical scavenging activity (37.29 mM TE), and FRAP activity (27.32 mM TE) (p<0.05). The total phenolic compound content (580.84 GAE mg/100 mL), total flavonoid content (166.24 CE mg/100 mL), and total anthocyanin content (0.74 mg/100 mL) followed a similar trend, again being the highest for this fraction. Two components (i.e., morriniside, loganin) were identified in the ethyl acetate and 40% ethanol fractions, and their contents were determined by high-performance liquid chromatography. Furthermore, the 40% ethanol fraction contained the highest quantity of total active components (p<0.05), and the presence of morroniside (405 [M-H]- and 451 [M+COOH-H]-) and loganin (389 [M-H]- and 435 [M+COOH-H]-) were confirmed by ultra-performance liquid chromatography-mass spectrometry.
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