인플루엔자 A 및 A/H1N1/2009 균주 검출을 위한 Cepheid Xpert Flu의 평가
Evaluation of the Xpert Flu for the Detection of Influenza A Virus and Influenza A/H1N1/2009 Strain
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배경: 인플루엔자 A/2009/H1N1의 창궐 이후, 인플루엔자 검사에 의한 조기 진단의 필요성이 더욱 높아졌다. 최근 핵산 추출부터 실시간중합효소연쇄반응까지 한 번의 검사로 시행할 수 있는 Xpert Flu (Cepheid, USA)가 개발되었다. 본 연구에서는 Xpert Flu의 인플루엔자 A 아형 H1N1/2009의 검출법으로서의 유용성을 평가하고자 한다. 방법: Xpert Flu와 기존 검사법과의 비교를 위해, RealTime ready Influenza A/H1N1 Detection Set (Roche Diagnostics)를 기준으로 평가를 시행하였다. 특이도 평가를 위하여 Parainfluenza virus 1, 2, 3, rhinovirus A/B, Metapneumovirus, Adenovirus, Coronavirus OC43/HKU1의 양성 검체로 Xpert flu와 RealTime ready Influenza A/H1N1 Detection Set로 동시에 검사를 시행하여 비교하는 한편, 두 검사법에서의 분석민감도 및 작업 흐름 분석을 시행하였다. 결과: 102개의 검체로 시행한 검사법 간 결과 비교에서 Xpert Flu는 인플루엔자 A와 A/H1N1/2009에서 각각 3개, 10개의 양성 결과를 보였고, RealTime ready Influenza A/H1N1 Detection Set는 각각 3개, 11개의 양성 결과를 보였다. 인플루엔자 A의 양성 일치도는 100% (3/3), A/H1N1/2009의 양성 일치도는 90.9% (10/11), 음성 일치도는 100% (88/88)이며, 두 검사법간의 상관성 검증에서 kappa값은 0.958 (95% 신뢰구간 0.877-1)이다. 특이도 평가에서는 인플루엔자 외 다른 호흡기바이러스 양성 검체에서 두 검사법 모두 음성 결과를 보였다. 분석민감도(최저검출한계) 분석 결과, RealTime ready Influenza A/H1N1 Detection Set는 200 TCID50/mL이고 Xpert Flu는 50 TCID50/mL였다. 작업 흐름 분석에서 RealTime ready Influenza A/H1N1 Detection Set의 전체 소요 시간은 128분이고(수작업 시간 30분), Xpert Flu의 전체 소요 시간은 85분이었다(수작업 시간 10분). 결론: Xpert Flu로 시행한 검사 결과는 기존에 사용된 RealTime ready Influenza A/H1N1 Detection Set에 비교하여 대등한 것으로 나타났다. 또한 Xpert Flu는 완전 자동화 및 밀폐 시스템으로, 수작업을 요하는 시간을 줄이면서도 검사 작업 시의 교차오염을 예방할 수 있을 것으로 기대된다.
Abstract
Background: Xpert Flu (Cepheid, USA) allows for fully automated real-time RT-PCR using a single-use disposable cartridge. The aim of this study was to evaluate Xpert Flu for the detection of influenza A virus and subtype A/H1N1/2009 pandemic virus. Methods: We conducted a prospective comparison study for Xpert Flu with the RealTime ready Influenza A/H1N1 Detection Set (Roche Diagnostics, Germany). Analytical specificities of the assays were determined by testing commonly encountered respiratory viral pathogens, including parainfluenza virus type 1/2/3, rhinovirus A, rhinovirus B, metapneumovirus, adenovirus, and coronavirus. The analytical sensitivities and workflow of both methods were also assessed. Results: A total of 102 consecutive clinical specimens were tested by both methods. Total agreement between the two methods was estimated to be 99.0% (101/102): 11 A/H1N1/2009 and 3 seasonal influenza A by the RealTime ready Influenza A/H1N1 Detection Set; 10 and 3 by Xpert Flu. No cross-reactivity was observed between influenza A/H1N1/2009 and other respiratory viral pathogens in either method. The limits of detection of the RealTime ready Influenza A/ H1N1 Detection Set and Xpert Flu were 500 TCID50/ mL and 20 TCID50/mL, respectively. Xpert Flu required 85 minutes (10 minutes of hands-on time) for processing, while RealTime ready Influenza A/ H1N1 Detection Set took 128 minutes (30 minutes of hands- on time). Conclusion: The results of Xpert Flu were comparable to those of the RealTime ready Influenza A/H1N1 Detection Set. It is of note that the fully automated and closed system of Xpert Flu could be advantageous for reducing hands-on time and for preventing cross-contamination during the testing process.
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