항암제를 투여한 HeLa와 OVCAR-3 세포주에서 Cytokeratin 18-Asp396 (M30) 항체를 이용한 항암제 감수성의 측정
Detection of chemosensitivity using K18-Asp396 (M30) antibody in HeLa and OVCAR-3 cell lines treated with anticancer agents
0
조회
0
다운로드
0
인용
0
참고문헌
키워드
초록
목적: 항암화학요법제의 투여로 유발되는 세포고사의 과정에서 cytokeratin 18의 분해 산물인 cytokeratin 18-Asp396 (M30) 단편의 노출된 신항원 결정기와 특이적으로 결합하는 M30 단클론항체를 이용한 세포고사 측정이 자궁경부암과 난소암에서 신보조화학요법의 감수성을 평가하기 위한 표지자로서의 사용가능성을 알아보기 위해 본 실험을 실시하였다. 연구 방법: 1,000 nM의 paclitaxel, 250 μg/mL의 cisplatin과 30 μM의 camptothecin의 투여와 함께 배양한 HeLa와 OVCAR-3 세포주들에서 M30 단클론항체를 이용한 면역형광염색 실시 후, 유세포분석에 의해 세포주기의 변화와 세포고사의 정도를 측정하였으며, 또한 이들의 배양액에서 M30 단클론항체를 이용한 ELISA법으로 세포고사의 정도를 측정했다. 결과: Paclitaxel 투여군에서 HeLa와 OVCAR-3 세포주 모두에서 대조군에 비해 G0G1이 감소되었고, G2M 분기 분획은 증가하였다. Cisplatin 투여군에서 두 세포주에서 G0G1과 S 분획이 대조군과 차이가 없었으며, HeLa 세포주에서는 G2M 분기 분획이 감소되고 OVCAR-3 세포주에서는 감소되는 경향이 관찰되었다. Camptothecin 투여군에서 S와 G2M 분기 분획이 두 세포주 모두에서 대조군과 차이가 없었으며, HeLa 세포주에서는 G0G1 분기 분획이 유의한 증가를 나타냈고, OVCAR-3 세포주에서는 G2M 분기 분획이 감소된 경향을 보였다. G0G1하 첨봉 (Sub-G0G1 peak)에 의해 측정된 세포고사의 정도는 paclitaxel 투여군에서 HeLa와 OVCAR-3 세포주 모두에서 차이가 없었으나, cisplatin 투 여군에서 OVCAR-3 세포주에서 유의하게 증가되었으며, camptothecin 투여군에서는 두 세포주 모두에서 유의하게 증가되었다. M30-FITC 형광도와 배양액 내에서 ELISA법으로 측정된 M30에 의한 세포고사의 정도는 모든 투여군에서 대조군보다 증가되었다. 결론: HeLa와 OVCAR-3 세포주들에서 paclitaxel, cisplatin과 camptothecin을 투여 후 다변수 유세포분석, 면역형광염색 및 ELISA법에 의해 세포주기 변화와 G0G1하 첨봉 및 M30 항원을 측정한 결과 세포고사의 유의한 증가가 확인됐으며, M30 항원의 측정이 좀 더 유의한 반응을 보였다.
Abstract
Objective: The aim of this study was to detect the levels of M30-antigens as a biomarker of apoptosis in cells and their culture media after treatments with anticancer drugs as a preclinical study. Methods: After HeLa and OVCAR-3 cells were treated respectively with paclitaxel, cisplatin, and camptothecin, the harvested cells were stained sequentially with M30 monoclonal antibodies and propidium iodide (PI). Afterwards, they were analyzed using a FACScan flow cytometer and observed under an immunofluorescence microscope for M30-FITC immunofluorescences. Levels of M30 antigens were also detected in their culture media using M30-Apoptosense ELISA kit. Results: The levels of M30-FITC immunofluorescences were elevated in both cell lines after each drug treatments compared with those of control cells. The levels of M30 antigens detected by ELISA in media culturing each cell line treated with each of drugs were elevated compared with those of control cells. Conclusion: This study suggests that M30-antigens representing chemotherapy induced apoptosis may be a useful biomarker for predicting and monitoring the response of neoadjuvant chemotherapy in patients with gynecologic cancers.
참고문헌 (20)
- Ayhan A, "Neoadjuvant chemotherapy in gynecological cancers", Eur J Gynaecol Oncol, 27, pp.11~15 (2006)
- Richardson ME, "Tumor cell heterogeneity: impact on mechanisms of therapeutic drug resistance", Int J Radiat Oncol Biol Phys, 39, pp.789~795 (1997)
- Maddika S, "Cell survival, cell death and cell cycle pathways are interconnected: implications for cancer therapy", Drug Resist Updat, 10, pp.13~29 (2007)
- Ueno T, "Detection of epithelial cell death in the body by cytokeratin 18 measurement", Biomed Pharmacother, 59(2), pp.359~362 (2005)
- Kramer G, "Differentiation between cell death modes using measurements of different soluble forms of extracellular cytokeratin 18", Cancer Res, 64, pp.1751~1756 (2004)
- Tiezzi DG, "Apoptosis induced by neoadjuvant chemotherapy in breast cancer", Pathology, 38, pp.21~27 (2006)
- Ormerod MG, "Investigating the relationship between the cell cycle and apoptosis using flow cytometry", J Immunol Methods, 265, pp.73~80 (2002)
- Linder S, "Cytokeratin Markers Come of Age", Tumor Biol, 28, pp.189~195 (2007)
- Gibb RK, "Apoptosis as a measure of chemosensitivity to cisplatin and taxol therapy in ovarian cancer cell lines", Gynecol Oncol, 65, pp.13~22 (1997)
- Goossens JF, "Relation between intracellular acidification and camptothecin- induced apoptosis in leukemia cells", Eur J Pharm Sci, 10, pp.125~131 (2000)
- Corver WE, "Simultaneous measurement of two cellular antigens and DNA using fluorescein- isothiocyanate, phycoerythrin and propidium iodide on a standard FACScan", Cytometry, 15, pp.117~128 (1994)
- Han KT, "Multiparametric flow cytometry in breast cancer cell line (MCF-7) stained with fluorescein isothiocyanate, phycoerythrin, and propidium iodide", J Korean Cancer Assoc, 31, pp.1129~1139 (1999)
- Napolitano U, "The role of neoadjuvant chemotherapy for squamous cell cervical cancer (Ib-IIIb): a long-term randomized trial", Eur J Gynaecol Oncol, 24, pp.51~59 (2003)
- Untch M, "Chemosensitivity testing in gynecologic oncology--dream or reality?", Recent Results Cancer Res, 161, pp.146~158 (2003)
- Ricci MS, "Chemotherapeutic approaches for targeting cell death pathways", Oncologist, 11, pp.342~357 (2006)
- Leers MP, "Immunocytochemical detection and mapping of a cytokeratin 18 neo-epitope exposed during early apoptosis", J Pathol, 187, pp.567~572 (1999)
- Woods CM, "Taxol-induced mitotic block triggers rapid onset of a p53-independent apoptotic pathway", Mol Med, 1, pp.506~526 (1995)
- Wang TH, "Paclitaxel- induced cell death : Where the cell cycle and apoptosis come together", Cancer, 88, pp.2619~2628 (2000)
- Wang D, "Cellular processing of platinum anticancer drugs", Nat Rev Drug Discov, 4, pp.307~320 (2005)
- Darzynkiewicz Z, "The cell cycle effects of camptothecin", Ann N Y Acad Sci, 803, pp.93~100 (1996)