한국인 혈우병 A의 Factor VIII 유전자 변이 양상
Factor VIII Gene Mutations in Korean Patients with Hemophilia A
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목적 : 한국인 혈우병 A 환자에서 연관성이 없는 환자 23명을 대상으로 유전자 변이를 파악하고자 하였다. 연구 방법 : 서로 연관성이 없는 혈우병 A 환자 23명을 대상으로 하였으며, 대상 환자 23명 모두 중증 혈우병 A였다. Factor VIII 유전자의 역위 (inversion)가 있는 경우는 제외하였다. 2001년 Vidal 등이 개발한 방법으로 직접 염기서열분석을 시행하였다. 26개의 exon과 promotor, splice junctions를 포함하는 23쌍의 primer로 단일 조건 하에 PCR을 시행하고 이 PCR 산물들을 38개의 sequencing primer로 직접 염기서열분석을 시행하여 유전자 변이 양상을 파악하였다. 결과 : 대상 23명의 분석 결과, 단일 뉴클레오티드의 치환 (substitution)에 의한 점 돌연변이 (point mutation)는 12명 (52.2%)에서 관찰되었으며, 이 중 6명은 nonsense 돌연변이로서 stop codon이 발생하였으며, 나머지 6명은 missense 돌연변이였다. 100 bp 이상의 유전자의 대 결손이 6명 (26.1%)에서 있었고, 2명 (8.7%)은 small deletion 자리에 각각 2 bp, 3 bp의 염기 삽입 (insertion)이 있었고, 1명은 유전자의 결손없이 2 bp의 삽입이 있었다. 나머지 2명은 복합 변이를 보여 각각 2종의 missense 돌연변이, missense 돌연변이와 4 bp의 삽입을 가지고 있었다. 관찰된 변이 23종 중 10종 (43.5%)은 새로이 발견된 유전자 변이였다. 결론 : 본 연구 결과 국내의 혈우병 A 환자의 유전자 변이는 여러 exon에 다양한 종류로 존재함을 알 수 있었다. 이러한 본 연구 결과는 한국인 혈우병 A의 분자유전학적 양상에 대한 중요한 자료로서 활용될 것이며, 향후 진단에 대상 환자 가계에 있어 분자유전학적 진단에 이용될 수 있다.
Abstract
Objective : To identify mutations within the factor VIII gene in Korean patients with severe hemophilia A. Design : A laboratory analysis Methods : We systematically sequenced the promoter, all exons and splice junctions of factor VIII gene in 23 unrelated Korean patients with severe hemophilia A. Patients with factor VIII gene inversion were excluded. Results : Twelve patients (52.2%) showed a point mutation, among which 6 were nonsense mutations and the other 6 were missense mutations. A large deletion was found in 6 (26.1%) patients, a small deletion in 2 (8.7%), a small insertion in one patient. Two patients had compound mutations: one patient had two missense mutations, and the other had a missense mutation and 4 bp insertion. Ten (43.5%) out of 23 mutations found are novel. Conclusion : Mutations within the factor VIII gene found in Korean patients with moderate to severe hemophilia A are diverse as expected. And we have found 10 novel mutations. Our results can help understanding the molecular pathology of hemophilia A.
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