변성 고성능 액체 크로마토그래피를 이용한 한우, 젖소 그리고 혼입육의 구분
Discrimination of Hanwoo from Holstein and Mixed Beef by DHPLC
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초록
정육 사업에서 고기의 원산지와 종을 표기 하는 것은 육질의 판단에 영향을 미친다. 유전자 마커 는 종을 판별하기 위한 증거로 사용되므로, 우리는 한우와 젖소 그리고 혼입육을 판단 할 수 있는 유전 자 마커의 개발 계획을 수립하였다. 소의 모든 종은 모색 유전자에 의하여 그 종이 결정 되며 모색 유전 자의 조절에 의하여 유멜라닌 또는 페오멜라닌이 합성되고, 이로 인하여 모색에 차이가 생기는 점을 이 용하여, 종을 판별하는 유전자 마커로 사용된다. 암소와 수소를 판별하기 위하여 Y 염색체 상에 존재하 는 성 결정 부위 유전자에 대응하는 프라이머를 제작하였다. 본 연구에서는 모색 유전자와 성 결정 유 전자를 다중 중합효소연쇄반응(multiplex-PCR)을 이용하여 증폭하였고, 증폭 산물을 제한 효소 MspA1I로 소화 시켰다. 이 반응물을 변성 고성능 액체 크로마토그래피(denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC)를 이용하여 분석하였다. 분석 결과 6가지의 크로마토그램을 확인 할 수 있었고, DHPLC 분석 방법은 한우, 젖소 그리고 혼입육을 쉽게 구별해 낼 수 있었다.
Abstract
In the meat industry, correct breed information in food labeling is required to assure meat quality. Genetic markers provide corroborating evidence to identify breed. We described the development of DNA markers to discriminate between Korean beef cattle (Hanwoo), Holstein, and mixed cow beefs. As most breeds are standardized for coat colour, the melanocortin 1 receptor (MC1R) gene, involved in the regulation of eu/pheomelanins synthesis, has been suggested as marker for breed traceability of products of animal origin. We also designed sex-determining region Y (SRY) gene specific primers for Y chromosome detection. In this study, fragments of MC1R gene and SRY gene were amplified by multiplex-PCR and subjected to digestion by MspA1I restriction endonuclease. Reaction products were analysised by denaturing high performance liquid chromatography (DHPLC). As a result, we identified 6 DHPLC peak types from MC1R gene and SRY gene analysis. DHPLC method showed more sensitive than RFLP method for DNA fragments analysis. Therefore, DHPLC method can apply to identify for Hanwoo, Holstein and mixed beef.
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