Cowpea mild mottle virus 특이유전자 검출을 위한 검역진단시스템 개발
Development of a Diagnostic System for the Detection of the Cowpea mild mottle virus Specific Gene in Quarantine
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Cowpea mild mottle virus (CPMMV)는 국내 미보고 바이러스로, 넓은 숙주범위를 가지며, 국내 관리급 검역바이러스로 지정되어 있다. 본 연구에서는 검역현장에서 신속하게 CPMMV를 진단할 수 있는 방법을 개발하였다. 이번 연구는 사용자를 위한 검사방법 개발을 위하여, 기존의 검역현장에서 활용하는 PCR 조성과 조건을 활용하였다. 본 연구에서는 CPMMV를 특이적으로 진단할 수 있는 2개의 RT-PCR 프라이머를 개발하였으며 각각 579와 638 bp를 증폭할 수 있다. 최종적으로 증폭되는 nested PCR 산물의 크기는 (579 → 298 bp)과 (638 → 252 bp)로 CPMMV의 특이 유전자를 진단할 수 있다. 또한, 제한효소 Xho I이 반응할 수 있는 염기서열을 삽입하여 양성대조구 플라스미드를 개발하였다. 이것은 실험실 오염으로부터 거짓양성을 검증할 수 있게 하였다. 본 연구는 CPMMV와 관련된 수입 작물로부터 검역진단에 기여할 것이라고 사료된다.
Abstract
Cowpea mild mottle virus (CPMMV) has a wide range of hosts, such as the pea family and tomato. CPMMV is a nonreported virus in Korea, and is domestically designated as a controlled virus associated with plant quarantine. In this study, a rapid diagnostic method for the detection of CPMMV at quarantine sites was developed. For the development of a userbased system, the PCR compositions and conditions use existing methods of quarantine for the viruses. Two sets of RTPCR and nested PCR were developed in this study that could be amplified from 579→298 dp and 638→252 bp, respectively. Furthermore, a sequence inserted positive control plasmid was developed, which is able to identify false-positives resulting from laboratory contamination. The findings of this study are important for the diagnosis of CPMMV in imported crops held in plant quarantine.
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