식물검역 Pelargonium Zonate Spot Virus 진단을 위한 RT-PCR 및 Nested PCR 프라이머 개발
Development of Nucleotide Primers for Diagnostic RT-PCR and Nested PCR Detection of Pelargonium Zonate Spot Virus in Quarantine
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초록
Pelargonium zonate spot virus (PZSV)는 group IV (+) ssRNA viruses, Bromoviridae에 속하는식물 병원체로, 일반적으로 토마토, 국화, 아티초크 및 제라늄에 감염된다. 본 연구는 검역 현장에서PZSV를 신속하고 특이적으로 진단 할 수 있는 PCR module을 개발하는 것을 목적으로 하였다. PZSV를 검출하기 위한 RT-PCR 프라이머 선발 결과, 각각 513 및 320 bp를 증폭하는2개 조합을 선발하였으며, 더욱 높은 검출감도로 검출할 수 있을 뿐아니라 RT-PCR을 검증할 수 있는 nested PCR 프라이머 조합을 개발하였다. 또한, 제한효소 Xho I 부위를 삽입한 유전자변형-양성대조구 플라스미드를 설계하여, PCR module에서 대조구로부터 오염을 검증할 수 있도록 개발하였다. 본 연구에서 개발한PCR module은 토마토, 국화, 아티초크 및 제라늄 등에서 PZSV를 간편, 신속 및 특이적으로 검출하여,지속적으로 식물검역에 활용할 수 있을 것으로 기대된다.
Abstract
Pelargonium zonate spot virus (PZSV) is plant pathogen, belongs to Bromoviridae, groupIV (+) ssRNA viruses that is commonly inspected in tomato, chrysanthemum, artichoke orgeranium. This study was aimed to develop PCR module for rapid and specific detection ofPZSV in quarantine. In this study, the development of two RT-PCR primer sets are efficientlyamplified 513 and 320 bp for detection of PZSV. Highly sensitive nested PCR primer setswere developed for detection of PZSV and verification of RT-PCR. In addition, amodified-positive control plasmid containing the restriction enzyme site XhoI was generated,for verification of contamination from PCR control. The present study demonstrated thatdiagnostic PCR module is useful for detection of PZSV in plant quarantine.
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