사람과 개의 genomic DNA 동시 정량을 위한 디지털 PCR 방법 개발
Development of digital PCR method for simultaneous quantification of Human and Dog genomic DNA
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초록
우리나라를 비롯한 전 세계적으로 반려동물의 비율이 증가함에 따라 개 관련 범죄도 증가하고 있으며, 범죄 현장에서 개 관련 생물학적 증거의 중요성도 높아지고 있다. 개 관련 범죄에서는 사람과 개의 시료가 혼합된 상태로 검출되는 경우가 많기 때문에 사람과 개의 DNA 프로파일을 구별하는 것은 관련 범죄 사건에서 가해자를 식별하고 용의자를 추적하는 데 중요한 역할을 할 수 있다. 그러나 혼합된 미량 시료에서 사람과 개를 동시 식별하여 신속하게 검출하는 것은 여전히 어려운 과제로 남아 있다. 본 연구에서는 droplet digital PCR(ddPCR)을 이용하여 혼합 시료에서 사람과 개 DNA를 동시에 식별하고 정량적으로 검출할 수 있는 방법을 개발하였다. 사람 특이적 마커로 HLA-DRA를 선택하였고, 개 특이적 마커로 OR6D7를 선택하였다. 각 표적의 종 특이성은 포유류 11종, 조류 3종을 포함한 14종의 control DNA를 사용하여 확인하였다. 민감도 테스트에서는 사람 DNA의 경우 0.0098 ng/μL, 개 DNA의 경우 0.0195 ng/μL의 검출한계를 보였다. 또한, 두 종의 DNA가 혼합된 시료에서도 각 DNA를 독립적으로 정확하게 검출하였으며, PCR 저해제 연구에서도 분석 결과에 영향을 미치지 않았다. 결과적으로, 본 연구에서는 사람과 개 DNA가 혼합된 시료에서 보다 정확하고 신뢰할 수 있는 정량화된 데이터를 제공할 수 있음을 시사하며, 법과학 및 관련 분야의 발전에 가능성을 제시한다.
Abstract
As the worldwide population of companion animals increases, dog-related crimes are also increasing, and it has reminded the importance of dog-related biological evidence. Also, these cases tend to be a frequent mix of human and dog samples, making precise identification more difficult. In this study, we developed a method using droplet digital PCR (ddPCR) to simultaneously identify and quantitatively detect human and dog DNA in mixed samples. HLA-DRA and OR6D7 were chosen as specific markers for human and dog respectively. The species specificity of each target was confirmed using 14 control DNA samples including 11 mammals and 3 birds. Sensitivity testing revealed detection limits of 0.0098 ng/μL for human and 0.0195 ng/μL for dog targets. Moreover, Even in samples containing two types of DNA mixed, each DNA was accurately detected independently. Additionally, the presence of certain inhibitors did not impact the analysis. Consequently, this study presents a reliable method for the simultaneous and precise identification and quantification of human and dog DNA, offering promising possibilities for advancements in forensic DNA analysis and related fields.
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