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理中湯이 Mite antigen으로 유발된 NC/Nga 생쥐의 아토피 피부염에 미치는 영향

Therapeutic effects of Yijungtang on atopic dermatitis-like skin lesions of NC/Nga mouse induced by Mite antigen

김윤희|한재경|서희연
대한한방소아과학회 (The Association of Pediatrics of Korean Medicine)|2011.04|대한한방소아과학회지 (The Journal of Pediatrics of Korean Medicine)|제25권 제1호|pp. 1-27

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아토피 피부염Atopic dermatitisMast cellNC/Nga mouse비만세포이중탕Mite antigen理中湯 (Yijungtang)
주제분류한의학

초록

Objectives: 본 연구의 목적은 RBL-2H3 비만세포를 이용한 in - vitro 실험과 NC/Nga 아토피 피부염 생쥐를 이용한 in - vivo 실험을 통해 이중탕이 아토피 피부염에 미치는 영향을 조사하기 위해 이루어졌다 Methods : In - vitro에서 real-time PCR을 이용하여 IL-4, IL-13 mRNA 유전자 발현을 측정하였으며, ELSA를 이용하여 IL-4, IL-13 생산을 분석하였다. 또한, GATA-1, GATA-2, NF-AT1, NF-AT2, AP-1와 NF-κB 같은 전사인자의 발현을 western blotting으로 분석하였다. 그리고 In-vivo에서 임상피부점수표(clinical skin score), NC/Nga 아토피 피부염 쥐의 혈액학, 혈청 total IgE와 IgG1를 평가하고 NC/Nga에서의 염증 정도, 총 세포 숫자, 액와림프절의 면역조직화학적 염색과 조직학적 소견, 배액림프절, 말초혈액의 단핵세포, 배부 피부 조직을 분석하였다. Results : YJT는 IL-4, IL-13 mRNA의 발현과 IL-4, IL-13의 생산을 감소시켰으며, GATA-2, NF-AT2, c-Fos와 NF-κB을 포함한 비만세포의 특정 전사 인자의 발현을 유의하게 감소시켰다. YJT의 경구투여는 피부강도점수(skin severity scores)를 감소시켰다. 또한, YJT의 경구투여는 혈청 내 L-5, IL-13, histamine, IgE와 같은 염증세포를 감소시켰다. YJT의 경구투여는 비장세포 배액 상층액에서 IFN-gamma를 상승시켰다. YJT의 경구투여는 말초혈액 단핵세포에서의 CD3e^+, CD19^+, CD4^+, CD8^+, CD3e^+,CD69^+ CD11b^+Gr-1^+, CCR3^+, 액와림프절에서의 CD4^+, CD8^+, CD3e^+CD69^+, B220^+CD23^+, 배부 피부 조직에서의 CD4^+, CD11b^+Gr-1^+의 세포 수를 감소시켰다. 조직학적 실험에서는 YJT의 경구투여로 인해 아토피 피부염이 유도된 NC/Nga 쥐의 피부에서 염증세포의 침투가 많이 향상되는 것을 보여주었다. Conclusions : YJT의 항알레르기 역할이 비만세포에서의 GATA-2, NF-AT2, NF-κB와 같은 전사인자 조절을 통해 IL-4, IL-13과 같은 Th2 세포의 하향조절을 함으로써 치료할 수 있을 것으로 사료된다. YJT는 분자 매개물과 면역세포를 조절하여 NC/Nga 쥐에서 유도된 아토피 피부염과 기능적으로 관련되어 있으며 아토피 피부염의 증상을 회복하는데 중요한 역할을 할 것이다.

Abstract

Objectives: The purpose of this study is to investigate the effects of Yijungtang(YJT) on atopic dermatitis in an in-vitro and in-vivo experiment using a RBL-2H3 mast cells and a NC/Nga atopic dermatitis mouse. Methods: In-vitro experiment, IL-4, IL-13 mRNA expression were evaluated by a real-time PCR, IL-4, IL-13 production by ELISA and transcription factor as GATA-1, GATA-2, NF-AT1, NF-AT2, AP-1 and NF-κB by western blotting. In-vivo experiment, clinical skin score we evaluated by, hematology and Serum total IgE and IgG1 of NC/Nga atopic dermatitis mouse, cytokine level, total number of cell, Immunohistochemical staining and Histological features of auxiliary lymph node(ALN), draining lymph node(DLN), peripheral blood mononuclear cells(PBMCs) and dorsal skin tissue in NC/Nga mouse. Results: YJT decreased IL-4, IL-13 mRNA expression, IL-4, IL-13 production and prominently decreased the expression of mast cell specific transcription factors including GATA-2, NF-AT2, c-Fos and NF-κB. YJT oral administration reduced the levels of skin severity scores. It also decreased the level of inflammatory cytokines such as IL-5, IL-13, histamine and IgE in the serum. It elevated IFN-gamma level in the spleenocyte culture supernatant but decreased. CD3e^+, CD19^+, CD4^+, CD8^+, CD3e^+CD69^+, CD11b^+Gr-1^+,, CCR3^+ in the PBMCs, CD4^+, CD8^+, CD3e^+CD69^+, B220^+CD23^+ in the ALN, CD4^+, CD3e^+CD69^+ in the ALN and CD4^+, CD11b^+Gr-1^+ in the dorsal skin. Histological examination showed that infiltration levels of immune cells in the skin of AD-induced NC/Nga mice were much improved by YJT oral administration. Conclusions: The anti-allergic activities of YJT may be mediated by down-regulation of Th2 cytokines, such as IL-4 and IL-13, through the regulation GATA-2, NF-AT2 and NF-κB transcription factors in mast cells. YJT would be regulate molecular mediators and immune cells which are functionally associated with atopic dermatitis induced in NC/Nga mice, and may play an important role in recovering AD symptoms.

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