초고전압전자현미경에 의한 엽육세포 색소체 미세구조의3차원적 분석
Three-Dimensional Analysis of theMesophyⅡ Plastids Using Ultra High Voltage Electron Microscopy
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초록
발달중인 Sedum및 Salsola의 엽육조직을 chemicalfixation과 high pressure freezing(HPF) 등으로 고정한 후,초박 및 후박절편으로 제작 carbon coating하여 TEM 및UHVEM으로 연속절편에 의한 2-D 영상과 tilt image data를 수집하였다. 이후 초미세 구조들에 대하여 tilting 및tomography 기법, 그리고 디지털화한 image의 3-D 입체구조 재구현에 필수적인 IMOD 프로그램을 적용한 image처리과정을 거쳐 UHVEM data에서 색소체내 초미세구조의 정보를 추출하여 세포수준에서의 3-D image를 분석하였다. 색소체 기질에서 녹말입자 및 틸라코이드에 인접하여 형성되는 CAM 및 C4 식물 색소체 결정체들은 어떤막으로도 둘러싸이지 않는 구조로서, Sedum rotundifolium색소체내 결정체는 수 m에 이르는 커다란 크기로 형성된다. 결정체 내에는 약 20nm 격자거리로 이루어진 기원을 알 수 없 는 수 백-수천 개의 미세소관성 요소들이 평행또는 격자상태로 정교한 구조를 이루며, 티라코이드 및녹말입자와 인접하여 발달하였다. C4 광합성 수행 Salsolakomarovii의 경 우, 결정체는 엽육세포 색소체에서만 발달하며 결정체 구성 기본요소들이 비교적 규칙적인 격자거리를 이루며 수십 개 배열하는 구조를 형성하였다. 특히,tilted image 및 3-D 입체구조 연구에서 결정체 형성에는이들과 인접하여 발달하는 틸라코이드막이 관여함을 알아 낼 수 있 었 다. 이는 엽육세포 색소체에는 결정체들이식물이 수행하는 광합성 유형에 따라 각기 다른 구성요소로 형성되어 Sedum의 경우와 같이 발달 중인 엽육조직에서 분화하거나 Salsola에서와 같이 세포 유형에 따라상이하게 발달하는 것으로 추정되었다.Kim IS et al. : Three-Dimensional Reconstruction of the Plastids 223224 Korean J. Electron Microscopy Vol. 36, No. 3, 20061A B C DE F G HI J K L-42 -36 -30 -24-18 -12 -6 00 6 12 18CrKim IS et al. : Three-Dimensional Reconstruction of the Plastids 2252A 3A2B 3B2C 3CCrCrCrCrCrCrSPSP226 Korean J. Electron Microscopy Vol. 36, No. 3, 2006
Abstract
Image processing by ultra high voltage electron microscopy (UHVEM) and tomography has offered majorenabled the improved analysis of three-dimensional cellular structures in botany. In the present study, usingUHVEM and tomography, we attempted to reconstruct the three-dimensional images of plastid inclusions thatprobably differentiate during photosynthesis. The foliar tissues were studied primarily with the TEM andfurther examined with UHVEM. The spatial relationship between tubular elements and the thylakoidal-performing Sedumaswell as in C4 Salsolaspecies. The inclusion bodies were found to occur only in early development in theformer, while they were found only in mesophyll cells in the latter. The specimens were tilted every twodegrees to obtain two-dimensional images with UHVEM and subsequently comparison has been made betweentomography, and IMOD program to generate and reconstruct three-dimensional images on the cellular level. InSedumplastids, the inclusion bodies consisted of tubular elements exhibiting about 20 nm distance betweenelements. However, in Salsola, plastid inclusion bodies demonstrated quite different element structure,displaying pattern, and origin relative to those of the Sedumrelationship with the starch grains in both species.