소 미성숙 난포란의 체외성숙시 β-Mercaptoethanol의 첨가가 체외성숙, 체외수정 및 Glutathione 수준에 미치는 영향
Effect of β-Mercaptoethanol Supplement during In Vitro Maturation on IVM, IVF and Glutathione Level in Bovine Oocytes
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초록
본 연구는 소의 미성숙 난포란의 체외성숙시 β-mercaptoethanol(β-ME)의 첨가가 체외성숙, 체외수정 후 웅성전핵의 형성 및 세포질 내의 GSH 수준에 미치는 영향을 알아보고자 실시하였다. 체외성숙시 25μM과 50μM의 β-ME를 첨가한 경우 대조구에 비하여 성숙율이 증가하는 것으로 나타났으며(p<0.05), 모든 실험구에 있어서 12시간 체외성숙보다 24시간 체외성숙에서 높은 성숙율을 나타냈다(p<0.05). 체외수정 후 웅성전핵 형성에 있어서는 25μM와 50μM 농도의 β-ME 첨가구에서 대조구에 비하여 높게 나타났으나(p<0.05), 25μM과 50μM 농도구와의 유의적인 차이는 없었다. GSH의 수준은 체외성숙 후 50μM의 β-ME 첨가구가 다른 처리구에 비교하여 높게 나타났으며(p<0.05), 체외수정 후 웅성전핵이 형성된 다음 세포질 내 GSH 수준 역시 50μM의 β-ME 첨가구에서 가장 높은 결과를 나타냈다(p<0.05).
Abstract
Experiments were conducted to determine the effects of beta-mercaptoethanol(β-ME) supplements to the maturation medium on in vitro fertilization(IVF) and intracellular glutathione(GSH) concentration. Bovine cumulus-intact oocytes were matured in TCM-199 medium containing FBS, hormonal supplements, and β-ME(0, 25 and 50μM) for 12h and 24 h. After culture, cumulus-free matured oocytes were co-incubated with frozen-thawed spermatozoa for 24h. Maturation rate increased(p<0.05) in β-ME treatment group, but no significant differences among treatment groups. Also, increases(p<0.05) in intracellular GSH concentration before and after fertilization were observed in 50μM β-ME supplements to the maturation medium. Male pronuclear formations after IVF was increased(p<0.05) in β-ME treatment group, but no significant difference among treatment groups. In conclusion, supplementing β-ME into the maturation medium increased maturation rates, fertilization rates, and intracellular GSH concentrations.