아민함유 유기화합물의 TLC 상 유도체화 반응물에 대한 반 정량적 TLC-Image 분석 방법의 비교
Comparison of Semi-Quantitative Analysis Method of Derivatized Amine-containing Organic Compounds
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아민 함유 유기화합물을 유도체화 시약 9-fluorenylmethyl chloroformate (FMOC-Cl)와 박막 크로마토그래피(TLC) 상에서 직접 반응시켜 생성된 유도체에 대한 반 정량법의 확립을 위한 예비 실험으로, 2종의 TLC image 분석 프로그램, ImageJ와 CP Atlas 2.0을 비교하였다. 유기합성을 통해 얻은 대조 물질(R1, R2)의 농도 0.01-1mg/mL (2 μL per spot)에 대한 선형상관관계는 2종 image 분석 프로그램 모두 유사한 선형상관관계를 보였다(r2 > 0.993). TLC상 유도체화 직접반응의 재현성 분석 결과에서는 2종 프로그램 모두 유사한 표준편차를 나타내어 이들 프로그램의 반 정량법으로서의 사용 가능성을 보였다(RSD= 2.0 - 4.4%). ImageJ는 CP Atlas 2.0에 비하여 낮은 농도의 TLC상 spots에 대해 구분이 가능한 peak를 보여 감도가 높음을 보였다. 그러나 대조물질 농도별 peaks의 분석에서는 CP Atlas 2.0이 비교적 낮은 background noise를 보여 상대적으로 용이한 작업과 낮은 표준편차를 보였다. 결국 낮은 농도의 spots에 대하여서는 ImageJ를 높은 농도의 spots에 대해서는 CP Atlas 2.0의 프로그램을 사용하는 것이 효과적인 것으로 나타났다.
Abstract
As a preliminary step for a semi-quantitative determination of derivative on TLC, two TLC-image analysis softwares, ImageJ and CP Atlas 2.0, were compared for derivatized organic compounds containing amine with reagent FMOC-Cl. Both TLC-image analysis programs using ImageJ and CP Atlas 2.0 demonstrated moderate and comparable linear relationship (r2 > 0.993) for the reference standard compounds (R1, R2) over the concentration range 0.01-1 mg/mL (2 μL per spot). Also programs showed similar relative standard deviations (2.0 - 4.4%) of derivatized spots for reaction repeatability on TLC at high and low sample concentration as a potential semi-quantitative method. At low concentration range ImageJ demonstrated easily distinguishable peaks to background noise (b/n) with better sensitivity compared to CP Atlas 2.0. But at high concentration range CP Atlas 2.0 generated peaks with low background noise compared to ImageJ which can be easily selected with low error rates. Therefore, ImageJ maybe used effectively for the semi-quantitation of the image of spots at low concentration and CP Atlas 2.0 for the image of spots at high concentration.
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