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인간 제대혈의 CD14+ 단핵구 세포 및 CD34+ 조혈모세포에서 유래된 수지상세포의 특성 비교

Comparison of characteristics of Dendritic Cells derived from CD 14+ Monocyte and CD34+ Hematopoietic Stem Cell in Human Umbilical Cord Blood

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주제분류산부인과학

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=목적: 제대혈의 CD14+ 단핵구 및 CD34+ 조혈모세포를 이용하여 동일한 배양조건에서 수지상세포로 분화시켜 얻은 각각의 수지상세포를 형태학적, 표현형적 및 기능적으로 비교 분석하여 그 특성을 알고 수지상세포를 이용한 항암면역치료에서 어떤 세포가 적합한 전구세포인지 판단하고자 한다. 연구 방법: 정상적인 만삭 산모를 대상으로 하여 태반이 만출 되기 전 채취된 제대혈에서 CD14+ 단핵구 (n=17)와 CD34+ 조혈모세포 (n=15)를 분리하여 GM-CSF (800 U/mL)과 IL-4 (500 U/mL)를 이용하여 수지상세포로 분화시킨 후 LPS (1 g/mL) 및 IFN-γ (1000 U/mL)를 이용하여 성숙시켜 confocal microscopy를 이용하여 형태학적 특성을 비교하였으며 FACS를 이용하여 표현형을 분석하였다. ELISA kit를 이용하여 수지상세포에서 생산된 IL-12p70의 양을 비교하였으며 혼합림프구 반응을 통해 T cell에 대한 증식능을 확인하였다. 결과: 단핵구 및 줄기세포에서 분화된 8일째 성숙 수지상세포는 형태학적으로 동일한 모양을 보였으며 CD80, CD83 및 CD86을 이용한 표현형 검사에서도 유사한 발현 정도를 보였다 (P>0.05). 기능적인 비교를 위한 혼합 림프구 반응에서도 모두 강력한 림프구 자극 작용을 보였으나 단핵구 기원의 수지상세포는 1:20의 비율에서 가장 강력한 효과를 보인 반면 조혈모세포 기원의 수지상세포는 1:2의 비율에서 가장 강력한 효과를 보이며 모든 비율의 혼합림프구 반응검사에서 단핵구 기원의 수지상세포에 비해 상대적으로 유의하게 높은 증식능을 보였다 (P<0.05). IL-12p70 정량검사에서 두 종류의 수지상세포 모두 6일째의 미성숙세포에서보다 8일째의 성숙세포에서 유의하게 높은 수치를 보였다 (P<0.05). 또한 조혈모세포 기원의 수지상세포에서 단핵구 유래 수지상세포에 비해 통계학적으로 높은 수치의 IL-12p70의 생산량을 보였다 (P<0.05).

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