타목시펜이 간세포암 세포주의 성장과 Transforming Growth Factor-β1의 발현에 미치는 영향
The Effects of Tamoxifen on Human Hepatocelluar Carcinoma Cell Proliferation and Transforming Growth Factor-β1 Expression
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초록
목적: 타목시펜을 진행성 간세포암 환자에게 투여한 결과 일부에서 효과가 있었다는 보고가 있으나 타목시펜이 간세포암의 성장을 억제하는 기전은 밝혀져 있지 않다. TGF-β1은 간세포암의 성장과 분화에 관여하는 중요한 성장인자로 알려져 있으며 최근 타목시펜이 TGF-β1의 분비조절에도 관여한다는 보고들이 있었다. 따라서 본 연구에서는 타목시펜이 간세포암의 성장과 TGF-β1의 발현에 미치는 영향을 알아보고 궁극적으로 타목시펜이 간세포암 환자에게 항암제로 사용될 수 있는지를 알아보고자 하였다. 대상과 방법: 인간 간세포암 세포주인 Hep 3B세포를 에스트로겐이 없는 RPMI 1640과 dextran coated charcoal로 처리한 5% fetal bovine serum을 혼합한 배지에서 3일 배양 후 2×104 세포/well로 분주하여 2일간 배양한 후 0.1 M, 0.5 M, 1 M, 5 M, 10 M 농도의 타목시펜으로 처치하고 6일간 배양하였다. 매일 세포를 수집하여 trypan blue로 염색한 후 생존 세포 수를 산출하였으며 상층액내 TGF-β1 농도는 ELISA법으로 측정하였다. 결과: 비교적 저 농도인 0.1 M 타목시펜 처치군은 배양 6일째 생존 세포수가 대조군에 비해 의미 있게 증가하였다(2.59×106 vs 1.97×106; p<0.05). 생존 세포수는 타목시펜 농도가 증가할수록 감소하여 10 M 처치군은 대조군에 비해 의미있는 감소를 보였다(1.40×106 vs 1.97×106; p<0.05). 상층액내의 TGF-β1의 분비량은 타목시펜 처치 농도와 상관없이 전 군에서 대조군에 비해 의미있게 감소하였으며 타목시펜 농도에 따른 각 군간에 차이는 없었다. 결론: 타목시펜은 실험실내에서 처치 농도에 따라 간세포암 세포주의 성장에 미치는 영향이 다양했으나, 처치 농도와 관계없이 일정한 정도로 TGF-β1의 발현을 억제하였다. 타목시펜의 이러한 효과는 생체에서 TGF-β1이 과발현된 간세포암의 성장과 진행을 억제할 것으로 생각된다. 또한 타목시펜은 TGF-β1의 발현을 조절하는 기전 이외의 다른 기전을 통해서도 간세포암의 성장을 억제하는 것으로 사료된다.
Abstract
Background/Aims: Tamoxifen has been tried in patients with hepatocellular carcinoma (HCC), however, its inhibitory mechanism remains unknown. In this study, we evaluated the effects of tamoxifen on HCC cell growth and the expression of transforming growth factor-β1 (TGF-β1) which had been known as an important cytokine in growth of HCC. Methods: Hep 3B cells were cultivated in estrogen free media with 0.1 µM, 0.5 µM, 1 µM, 5 µM, and 10 µM of tamoxifen for 6 days. Viable cells were counted daily and the TGF-β1 concentrations in supernatant were measured by ELISA method. Results: The number of viable HCC cells increased rather significantly after the treatment of tamoxifen of lower concentration (0.1 µM) compared with that of the control (2.59×107 vs. 1.97×107; p<0.05). As the concentration of treated tamoxifen was higher, the number of viable HCC cells became gradually less, resulting in the significant decrease of it at the highest concentration (10 µM) compared with that of the control (1.40×107 vs. 1.97×107; p<0.05). TGF-β1 concentration in supernatant of tamoxifen-treated samples was significantly decreased compared with those of controls, regardless of the amount of treated tamoxifen. Conclusions: These results suggest that tamoxifen may suppress TGF-β1 expression to an extent, although it has different effects on the proliferation of HCC cells, at the various concentrations of this agent in vitro. Such effects of tamoxifen on TGF-β1 expression may inhibit the growth and progression of HCCs over-expressing TGF-β1 in vivo.(Korean J Hepatol 2002; 9:10-16)