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논문

장출혈성대장균 O157:H7 유래 재조합 Intimin의 발현과 그의 면역반응 효과

Expression of Recombinant Intimin of Escherichia coli O157:H7 and its Effect of Immune Response

김정우|이상래|김도균
한국축산학회 (Korean Society of Animal Sciences and Technology)|2004.06|한국축산학회지 (Journal of Animal Science and Technology)|제46권 제3호|pp. 495-502

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주제분류축산학

초록

장출혈성대장균 O157:H7의 eae유전자 산물인 intimin은 장 상피세포의 부착성을 조절하는 단백질로 알려져 있다. Intimin의 C-말단 아미노산 잔기와(His)6이 혼합되어 이루어진 plasmid를 작성하여 재조합 단백질(34kDa)을 발현시켰다. 발현된 재조합 intimin 단백질의 면역원성을 확인하기 위해 토끼와 산란계에서 항혈청 및 난황항체(IgY)를 제조하였다.O157:H7에서 분리한 세포외막단백질(OMPs)과 제조된 항혈청과의 western blot상의 반응에서 약 94kDa의 위치에서 양성반응을 보여 발현된 재조합 단백질의 면역원성 효과가 확인되었다. 면역원성이 확인된 단백질을 산란계에 면역한 결과, 면역 후 4～6주 경부터 높은 수준의 항체가 형성되었다.재조합 intimin 단백질에 대한 난황 항체의 항원결합능력 조사를 위하여 중화반응시험을 수행한 결과, 재조합 intimin 단백질에 대한 난황 항체가 O157:H7과 강하게 결합하는 것으로 나타났다.따라서 본 연구에서 발현된 재조합 intimin 단백질은 토끼와 산란계의 면역반응을 유도할 수 있는 효율적인 면역원임과 동시에 난황 항체 생산을 위한 항원으로의 이용가능성이 확인되었다.

Abstract

Intimin, the product of eae gene in EHEC O157:H7, is required for intimate adherence. In this study, the C-terminal region(281 amino acids) of the EHEC O157:H7 intimin were expressed as a protein fusion with (His)6, which was used to raise antiserum in rabbits. The antiserum reacted in western blot with a 94kDa outer membrane protein of EHEC O157:H7. It was observed that the antibody titers both in egg yolk and serum appeared in 2～4 weeks after immunization with fusion protein. At the time of 8 weeks, the titre of egg yolk was found to be higher than that of sera. According to the results of neutralization test, chicken egg-yolk antibody(IgY) against the recombinant intimin strongly reacted to EHEC O157:H7. We conclude that a truncated recombinant intimin could be used as an immunogen to elicit antibody(IgY) against O157:H7.

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