HLA 동종항체 선별을 위한 ELISA 및 Luminex Panel Reactive Antibody 검사의 비교평가
Comparative Evaluation of ELISA and Luminex Panel Reactive Antibody Assays for HLA Alloantibody Screening
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배경 : HLA 항체 검출을 위한 검사에서 추출한 HLA 항원을 고체상에 부착하여 검사하는 방법의 사용이 증가하고 있다. 본 연구에서는 ELISA와 Luminex 방법을 이용한 panel reactive antibody (PRA) 검사를 시행하고 교차시험 결과와 함께 분석 하였다. 방법 : 신이식 환자에서 채취한 90개 혈청을 포함한 총 111개 의 혈청을 대상으로 하였다. ELISA-PRA는 Lambda Antigen Tray Class I and II mixed kit (One Lambda, Inc., USA)를 이용하였고 추가검사를 시행하여 HLA 특이성을 동정하였다. Luminex-PRA 검사는 LABScreen mixed kits (One Lambda, Inc., USA)와 LIFECODES LifeScreen Deluxe kits (Tepnel Lifecodes Co., USA)를 이용하여 수행하였다. PRA 검사의 유세포분석기를 이용한 교차시험(FCXM) 결과에 대한 양성예측 률과 음성예측률을 분석하였고, 아울러 초기급성반응에 대한 민 감도와 특이도를 확인하였다. 결과 : Tepnel (P=0.006)과 One Lambda-Luminex-PRA 방법(P<0.001)의 양성률은 ELISA-PRA 보다 높았으나, 두 가 지 Luminex 방법들 간에 유의한 차이는 없었다(P=0.087). 세 가 지 PRA 검사법의 전체적인 일치율은 62.2% (69/111)였다. FCXM에 대한 PRA 검사의 양성예측률과 음성예측률은 각각 33.3- 45.7%와 85.7-89.5%였다. Class I HLA 항체 검출의 경우, 두 가지 Luminex 방법 중 One Lambda가 Tepnel보다 더 높은 양 성률을 나타내었다. 48명의 신이식 환자에서 이식 후 초기급성 반응 발생에 대한 이식 전 PRA 검사의 민감도는 Tepnel (P= 0.007)과 One Lambda (P=0.003) Luminex 방법이 ELISA 방법보다 더 높았다. 결론 : 본 연구결과, HLA 항체 검출을 위해 사용되는 PRA 방법들 간에 결과의 불일치를 나타낼 수 있음을 보여주었다. Luminex 방법은 ELISA 방법에 비해 HLA 항체검출을 위한 민감도가 높으므로 이식 검사실에서 일상적인 PRA 검사로 사 용될 수 있을 것이다.
Abstract
Background : For the detection of HLA antibodies, solid-phase tests using purified HLA antigens are increasingly used. In this study, we analyzed the panel reactive antibody (PRA) test results using ELISA and Luminex methods, and the results were compared with those of crossmatch test. Methods : A total of 111 sera including 90 sera from kidney transplanted patients were tested. ELISA-PRA was performed using Lambda Antigen Tray Class I and II Mixed kits (One Lambda Inc., USA) and additional test was performed to identify HLA specificities. Luminex-PRA tests were performed using LABScreen Mixed kits (One Lambda Inc., USA) and LIFECODES LifeScreen Deluxe kits (Tepnel Co., USA). Results : The positive rates of PRA were higher in Tepnel (P=0.006) and One Lambda Luminex (P<0.001) methods than ELISA, without significant difference between two Luminex methods (P=0.087). The overall concordance rate among the three PRA tests was 62.2% (69/111). The positive and negative predictive values of PRA tests for the flow cytometric crossmatch were 33.3-45.7% and 85.7-89.5%, respectively. Of the two Luminex methods, One Lambda showed higher positive rate than Tepnel for the detection of class I antibodies. The sensitivity of pretransplant PRA for the detection of posttransplant acute rejection episodes was higher in Luminex (P=0.007 for Tepnel, P=0.003 for One lambda) than ELISA method. Conclusions : Different methods used to detect HLA antibodies showed discrepant results. As the Luminex method was more sensitive than ELISA for the detection of HLA antibodies, it can be used as a routine test in the transplantation laboratory.
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