가와사끼병에서 말초 혈액 B세포의 클론성 팽창

서 론 : 소아에서 흔한 가와사끼병에 관한 임상적, 역학적, 면역학적 및 병리학적 특성에 관한 연구가 계속되어 많은 것들이 밝혀져 있는 반면에, 아직 발병 원인 및 기전은 명확히 밝혀져 있지 않다. 최근 가와사끼병 환자에서 Vβ2 및 Vβ8 family를 표현하는 T 세포의 선택적 증식이 관찰되어 초항원의 관련 가능성이 제기된 이후, 가와사끼병에서 T세포의 활성화에 대한 연구는 활발하게 진행되어 온 반면 B세포의 활성화에 관한 보고는 많지 않다. 연구자는 가와사끼병으로 진단 받은 환아에서 B세포의 중쇄군 분포를 관찰하고, 중쇄군의 clonal expansion이 보이는지 확인하여 가와사끼병의 말초혈액내 B세포의 활성화 양상 및 초항원에 의한 자극의 증거를 찾고자 본 연구를 시행하였다. 방 법 : 가와사끼병으로 진단받은 환아에서 급성기 및 아급성기의 말초혈액 B세포 분포를 확인하였으며, B세포의 RNA로부터 추출하여 만든 cDNA를 이용하여 PCR을 시행하여 중쇄군의 분포를 관찰하였고, VH군중 특정 중쇄군의 oligoclonal expansion을 확인하기 위하여 각 군별로 시행한 PCR 산물을 이용하여 nested PCR을 시행하여 각 군에서 CDR3 부위를 중복하여 관찰하였다. 아울러 PCR산물을 이용하여 cloning과 sequencing을 통하여 CDR3 부위의 DNA를 분석하였다. 결 과 : 말초혈액내 B세포 중쇄군의 일차 PCR을 시행하였을 때, 중쇄군의 분포는 다양하게 나타나지만 50%이상의 환자에서는 VH1에서부터 VH6 까지 모든 중쇄군이 표현되지만 경우에 따라서는 VH3 군만 유일하게 표현되기도 하고, 일부만 표현되기도 하였다. 그러나 Vκ의 경우는 모든 환자의 경우 Vκ1에서 Vκ4까지 모두 표현되는 것을 관찰할 수 있었다. 16명의 환자에서 VH군의 표현 빈도를 조사한 결과 IgM(16명 전례)과 IgG(16명중 15례) 모두에서 VH3군이 가장 많이 표현되는 것을 볼 수 있었고, 그 다음에는 VH2, VH1 순으로 표현되며 VH6가 가장 적게 표현되는 것을 관찰할 수 있었다. CDR3 부위를 관찰하면서 어떤 크기의 클론이 증식되는 지 확인한 결과 VH6 군에서 9개의 아미노산으로 구성된 클론이 5명에서 관찰되어 가장 많은 이용을 보였다. CDR3 부위의 클론들은 급성기에 관찰된 것이 아급성기에 없어지는 것도 있었지만 일부는 아급성기에도 지속되며 또는 아급성기에도 새롭게 표현되는 경우도 있었다. CDR3의 DNA sequence를 조사해본 결과 dominant clone은 찾아볼 수 없었지만 53개의 클론 중에서 DH6가 14개, JH4가 34개에서 가장 많이 이용되었으며, DH6와 JH4가 함께 이용된 경우는 6개의 클론을 보여서, 가와사끼병의 말초 B세포의 클론성 팽창을 강력하게 뒷받침하고 있었다.